大奖娱乐888基本信息

1.大奖娱乐888合成的基本原理?
大奖娱乐888固相合成法是大奖娱乐888合成化学的一个重大的突破。它的最大特点是不必纯化中间产物,合成过程可以连续进行,进而为大奖娱乐888合成的自动化奠定了基础。目前全自动大奖娱乐888的合成,基本都是固相合成。其基本过程如下:
基于Fmoc化学合成,先将所要合成的目标大奖娱乐888的C-端氨基酸的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这一氨基酸的氨基作为大奖娱乐888合成的起点,同其它的氨基酸已经活化的羧基作用形成肽键,不断重复这一过程,即可得到大奖娱乐888。根据大奖娱乐888的氨基酸组成不同,大奖娱乐888后处理方式不同,纯化方式也有差异。
2.做免疫用的大奖娱乐888多长为合适?
答:一般约10-15个氨基酸,当然长一些免疫效果好一些,不过合成费用也会增加。MAP大奖娱乐888则希望长度在15aa以上,效果较好。另外,10aa以下的大奖娱乐888免疫效果比较差。
3.免疫用大奖娱乐888的纯度需要很高吗?
答:一般而言, 免疫用Peptide,70-85%即可。
4.我们合成的大奖娱乐888溶解性不好,大奖娱乐888就有问题对吗?
答:很难准确预测一个大奖娱乐888的溶解性及合适的溶剂是什么。如果大奖娱乐888难以溶解就认为大奖娱乐888合成有问题这个观念并不正确。
5.大奖娱乐888状态是如何?如何保存储存?
答:我们提供的大奖娱乐888是粉末状,一般为灰白色,组成不同,大奖娱乐888粉末的颜色有差异,大奖娱乐888一般长期保存需要避光保存,并应保存在-20度,短期可以保存在4度。可以短时间的话是以室温运输。
6.如何溶解大奖娱乐888?
答:溶解大奖娱乐888是非常复杂的事情,一般很难一下子确定合适的溶剂。通常是先取一点试验,在没有确定合适的溶剂前千万不要全部溶解。
下列方法有助于您选择合适的溶剂:
(1)判定大奖娱乐888的电荷特定,设定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1;碱性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其它氨基酸的电荷为0。计算出净电荷数。
(2)如果净电荷数 >0,大奖娱乐888为碱性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果大奖娱乐888还不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀释。
(3)如果净电荷数<0,大奖娱乐888为酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀释。
(4)如果净电荷数=0,大奖娱乐888为中性,一般需要用有机溶剂如乙腈,甲醇或异丙醇,DMSO等溶解。还有人建议需要尿素来溶解疏水性很大的大奖娱乐888。
7.非HPLC纯化的大奖娱乐888中有哪些杂质?
答:粗品和脱盐级别的大奖娱乐888中大奖娱乐888和非大奖娱乐888类杂质:如非全长大奖娱乐888和大奖娱乐888后处理的一些原料如DTT、TFA等
8.HPLC纯化的大奖娱乐888有哪些杂质?
答:经过HPLC纯化的大奖娱乐888,仍会有一些杂质存在,其中的杂质主要是短肽和微量TFA。
9.多长的大奖娱乐888为合适?
答:大奖娱乐888合成需要考虑大奖娱乐888的长度,电荷,亲疏水性等因素。长度越长,合成粗品的纯度和产率都随着降低,纯化的难度和无法合成的几率就会大些。当然大奖娱乐888功能区的序列是无法改变的,但是为了大奖娱乐888的顺利合成,有时不得不在功能区的上下游增加一些辅助氨基酸,以改善大奖娱乐888的溶解性和亲疏水性。如果大奖娱乐888太短,合成也可能有问题,主要问题是合成的大奖娱乐888在后处理过程中有一定的难度,5肽以下的大奖娱乐888,一般要有疏水的氨基酸,否则后处理难度加大。15个氨基酸残基以下的大奖娱乐888一般都可以得到满意的产率和得率。
10.如何从大奖娱乐888序列中判定大奖娱乐888的溶解性?
(1)大奖娱乐888中如果含有高比例的疏水性很强的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp,大奖娱乐888很难溶解于水性溶液中或根本不可能溶解。这些氨基酸无论是纯化或合成,都有可能有问题。
(2)一般情况下疏水性氨基酸的比例<50%,不能连续5个连续aa为疏水性,带电荷的氨基酸的(正电荷K,R,H,N-terminus,负电荷D,E,C- terminus)的比例达到20%,在大奖娱乐888的N或C短如果能增加极性氨基酸,也可以改善溶解性。
11.为什么含有Cys,Met,或Trp的大奖娱乐888难合成?
答:含有Cys, Met,或Trp的大奖娱乐888难以合成,同时难以获得高纯度的产品。主要因为这些基团不稳定,易氧化。这些大奖娱乐888的使用和储存都需要特别注意,避免反复开启盖子。
12.为什么有些大奖娱乐888的合成产率或纯度会比较低?
答:大奖娱乐888合成与引子合成有比较大的区别,不能合成的引子很少,但是不能合成的大奖娱乐888经常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr这些氨基酸比邻或重复时,大奖娱乐888链在合成过程中不能完全舒展溶解,合成效率下降。以下几种情形,合成效率和产物的纯度都比较低,如:重复Pro,Ser-Ser,重复Asp,4个连续Gly等.
13.大奖娱乐888是如何纯化的?
答:大奖娱乐888纯化一般使用反相柱(如C8,C18等),214nm。缓冲体系通常为含TFA的溶剂,pH 2.0 。Buffer A为含0.1%TFA in ddH2O,Buffer B为1%TFA/ACN/ pH 2.0。纯化前用Buffer A溶解;如果溶解不好,用Buffer B溶解后,然后用Buffer A稀释;对疏水性强的大奖娱乐888,有时还需要加入少量的Formic Acid或醋酸。HPLC分析大奖娱乐888粗产物,如果大奖娱乐888不长(15aa以下),一般会有主峰,主峰通常为全长产物;对于20aa以上的长肽,如果没有主峰,HPLC需搭配Mass来判定分子量,进而确定哪个峰是所要合成的大奖娱乐888
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